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PCR實驗代測服務基線(baseline)通常是3-15個循環(huán)的熒光信號;同一次反應中針對不同的基因需單獨設置基線
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PCR實驗代測服務
Real-time qPCR常見參數
基線(baseline)通常是3-15個循環(huán)的熒光信號
同一次反應中針對不同的基因需單獨設置基線
閾值(threshold)
自動設置是3-15個循環(huán)的熒光信號的標準偏差的10倍
手動設置:置于指數擴增期,剛好可以清楚地看到熒光信號明顯增強
同一次反應中針對不同的基因可單獨設置閾值,但對于同一個基因擴增一定要用同一個閾值。
Ct值:與起始濃度的對數成線性關系。
分析定量時候一般取Ct:15-35。太大或者太小都會導致定量的不準確。
Rn(Normalized reporter)是熒光報告基團的熒光發(fā)射強度與參比染料的熒光發(fā)射強度的比值。
△Rn:△Rn是Rn扣除基線后得到的標準化結果(△Rn=Rn-基線)。
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PCR實驗代測服務
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